手機：13816550546
服務熱線
021-60873559
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | 3D Gel /3D Gel-RGD |
|---|---|---|---|
| 規格 | 10ml/瓶 | 供貨周期 | 現貨 |
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
NANOLAB 3D Gel™即用型 3D細胞培養水凝膠
產品介紹：
即用型 3D 細胞培養水凝膠
產品描述和規格
3D Gel™ 為無動物源性多糖水凝膠體系，模仿天然細胞外基質（ECM） 環境。水凝膠為即用型中性 pH 溶液，室溫即可穩定保存。使用時，只需與細
胞培養基混合即可形成水凝膠基質。水凝膠顏色透明，具有可滲透性，相容 于多種細胞成像系統。培養在水凝膠系統的細胞可在試驗后輕松收獲，水凝 膠也可注射，非常適合體內研究。3D Gel 為細胞創造一個具功能性且優 化的環境，讓細胞感覺在家一樣。從 2D 凝膠培養，3D 細胞培養到動物注射， 3D Gel 提供一個可以同時適用于體外研究與活體實驗的共通操作平臺。 TheWell 有兩種水凝膠系統：
3D Gel – 適用于懸浮細胞系
3D Gel-RGD（RGD 肽修飾的 3D Gel）– 適用于貼壁細胞
應用說明：
產品： 3D Gel (Cat#: NANO001)
3DGel-RGD (Cat#: NANO002)
僅供科研用途，不得用于診斷過程。
3D細胞培養
（可注射水凝膠制備）
材料：
3D Gel，細胞培養基，微量移液器或注射器，細胞培養孔板，細胞， 37 ?C 水浴
方法：
1. 在 37?C 預熱 3D Gel 溶液和細胞培養基。
2. 向 4mL 3D Gel 溶液中加入 1mL 細胞懸液，使用微量移液器（或 快速渦旋振蕩）輕輕混勻，盡量不要產生氣泡。（對于水凝膠注射：混合 物可轉移到注射器，水凝膠在穩定 15-30 分鐘后即可用于注射。）
3. 將水凝膠混合液轉移至細胞培養孔板。
注：傾斜/旋轉培養板，以確保水凝膠在培養板上包被均勻。
不同細胞板的推薦體積如下表：
4. 等待 15 分鐘至水凝膠穩定。
5. 小心加入細胞培養基以覆蓋水凝膠溶液。
6. 將細胞培養板加入培養箱，每 48 小時換液
注：
l 預熱 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。
l 終細胞濃度可根據不同細胞類型調整。我們推薦 2×105 to 1×106。
2D 凝膠培養
材料：
3D Gel，細胞培養基或 PBS，微量移液器，細胞培養孔板，細胞，37 ?C 水浴
方法：
1. 在 37 ?C 預熱 3D Gel 溶液和細胞培養基。
2. 向 4mL VitroGel 3D 溶液中加入 1mL 細胞培養基(或 PBS)，使用微量 移液器（或快速渦旋振蕩）輕輕混勻，盡量不要產生氣泡。
3. 將水凝膠混合液轉移至細胞培養孔板。
注：傾斜/旋轉培養板，以確保水凝膠在培養板上包被均勻。
4. 等待 15 分鐘至水凝膠穩定。
5. 吸出多余液體，小心將細胞加到水凝膠頂部。
6. 將細胞培養板加入培養箱，每 48 小時換液。
注：
l 預熱 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。
l 終細胞濃度可根據不同細胞類型調整。
NANOLAB 3D Gel™即用型 3D細胞培養水凝膠
初次使用說明
（請在使用產品前仔細閱讀）
請根據不同的細胞系和培養基組分優化 VitroGel 3D 水凝膠系統，以得到更
好的結果。初次使用用戶，強烈建議培養不同的細胞系時，都進行水凝膠濃 度梯度測試。
請參照以下步驟設置水凝膠濃度梯度：
1. 稀釋：可通過稀釋水凝膠溶液調節終水凝膠強度：直接將水凝膠溶液 與去離子水或 0.1X PBS（不含鈣或鎂離子）以 1:0-1:5（水凝膠溶液： 去離子水，v/v）室溫混合。（終膠強度 1:0 > 1:1 > 1:2 > 1:3 > 1:4 > 1:5）
2. 成膠：稀釋的水凝膠溶液和細胞培養基不同的混合比例會影響成膠速度 及終的膠強度。推薦的混合比例為 4:1-1:3（稀釋的水凝膠：細胞培養 基， v/v）。
l 相同稀釋度的水凝膠溶液，添加越多細胞培養基，成膠越快。 對于稀釋度較高的水凝膠溶液（eg. 1:3, 1:4 or 1:5），請使用較多 的細胞培養液混合，以確保水凝膠在合理的時間內成膠。
l 不同細胞培養基的推薦混合比例，請參考下表。
活/死細胞分析
材料：
培養于 3D Gel 系統中的細胞，活/死細胞染色液，PBS，微量移液器， 熒光顯微鏡
方法：
1. 移去覆蓋于水凝膠之上的細胞培養基，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
2. 用 PBS 制備 5X 活/死細胞染色溶液
3. 將活/死細胞染色溶液直接加入到水凝膠中并淹沒整個凝膠。推薦體積如 下表：
4. 在黑暗中孵育 5 分鐘，在熒光顯微鏡下觀察。
注：
l 推薦使用 5X 染色液作為起始濃度。可基于不同細胞系和成像系統優化 更佳濃度。
l 細胞染色后應盡快分析
細胞收獲：
材料：
培養于 3D Gel 系統中的細胞，0.1XPBS 或去離子水，離心管，微量移
液器，37?C 水浴，漩渦震蕩儀
方法：(使用 24 孔板，250μL 膠/孔為例)
1. 在 37℃水浴預熱 0.1X PBS(或去離子水)及空的離心管。
2. 由培養箱取出細胞培養板，棄掉覆蓋于水凝膠頂部的培養基。
3. 每孔加入 1 mL 預熱的 0.1X PBS，并上下吹打以*混勻。
4. 將混合物加入預熱的離心管。
5. 用 1 mL 預熱的 0.1X PBS 潤洗每個孔，并加入離心管中。
6. 上下吹打，充分混勻，并加入預熱的 0.1X PBS 至 10mL。
7. 將離心管漩渦震蕩 5-10 秒，并在 37℃水浴放置 1-5 分鐘（可選）。
8. 1,000 rpm 離心 2-5 分鐘，棄上清，收集細胞沉淀。
9. 用預熱的 0.1X PBS 重懸細胞，如果需要可重復 6-8 步驟一次(可選)。
注：
l 使用預熱的 0.1X PBS 或去離子水，不要使用冷的溶液或 1X PBS（或 高離子濃度的細胞培養基）。
l 根據不同細胞系優化離心的速度和時間。
熒光染色：
材料：
培養于 3D Gel 系統中的細胞，PBS，微量移液器，固定液（4％甲醛 PBS 溶液），滲透液（0.1% Triton X-100 PBS 溶液），肌動蛋白抑制劑染色液，細 胞核染色液，微量移液管，熒光顯微鏡。
方法：
1. 移去覆蓋于水凝膠之上的細胞培養基，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
2. 將固定液加入水凝膠中，并在室溫孵育 30 分鐘。
3. 棄去固定液，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
4. 加入滲透液并淹沒整個凝膠，置于室溫 5 分鐘。
5. 棄去滲透液，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
6. 加入肌動蛋白抑制劑染色液，室溫，黑暗孵育 1 小時。
7. 棄去肌動蛋白抑制劑染色液，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
8. 加入細胞核染色液，室溫，黑暗孵育 5 分鐘。
9. 棄去細胞核染色液， 并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
10. 熒光顯微鏡下觀察。
注：
l 根據產品使用說明配制染色液。可根據不同細胞系和水凝膠調節染色液 終濃度。
l 在清洗步驟中，小心添加或移除溶液，以避免損失水凝膠/細胞。
l 孵育時間可根據不同細胞系調整。
l 水凝膠加入染色液后，應避免光照。
l 確保 PBS 沖洗步驟*，同時水凝膠在整個過程中都需要溶液覆蓋。
組織學分析：
材料：
培養于 3D Gel 系統中的細胞，PBS，卡夾，石蠟，二甲苯，固定液（10％ 福爾馬林），乙醇（50-100％）
方法：
1. 移去覆蓋于水凝膠之上的細胞培養基，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次
2. 將固定液加入水凝膠中，并在室溫孵育 30 分鐘。
3. 棄去固定液，并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。
4. 將水凝膠放于卡夾中，用乙醇，按照以下順序脫水：
50％（10 分鐘） - 70％（10 分鐘） - 80％（10 分鐘） - 95％（10 分鐘） - 100％（10 分鐘） - 100％（10 分鐘） - 100％（10 分鐘）。
5. 將乙醇換為二甲苯，按照以下順序脫水：
65％乙醇：35％二甲苯（10-15 分鐘）-50％乙醇+50％二甲苯（10-15 分鐘）- 35％乙醇+65％二甲苯（10-15 分鐘） - 100％二甲苯（10-15 分鐘） - 100％二甲苯（10-15 分鐘） - 100％二甲苯（10 分鐘）
6. 將二甲苯換為石蠟，按照以下順序：
65％二甲苯+35％石蠟(30 分鐘) - 50％二甲苯+50％石蠟(30 分鐘) -
35％二甲苯+65％石蠟(30 分鐘) - 100% 石蠟 (1-2 小時) - 100% 石 蠟(1-2 小時或過夜)
7. 嵌入新鮮的石蠟中后，切片，放于顯微鏡載玻片上。
8. 根據不同的應用進行染色和組裝。
注：
l 根據不同細胞系和水凝膠大小優化孵育時間。確保水凝膠在整個過程中 都被溶液覆蓋。
表 B：不同細胞的推薦稀釋比例和混合比例
